Tinción de tejidos

Definición de tinción de tejidos

Las tinciones o colorantes nos permiten examinar las estructuras con más detalle al aumentar el contraste de las estructuras de la célula, y también pueden atravesar las paredes celulares ayudando a los investigadores a analizar los procesos metabólicos.

Normalmente observamos estas estructuras al microscopio después de la tinción. Esto se debe a que los tejidos son transparentes a nuestros ojos sin tinción, por lo que hay que teñirlos o colorearlos con diferentes tintes. Las tinciones y los colorantes suelen utilizarse comercialmente en el laboratorio para conocer los tejidos biológicos y las células y diagnosticar enfermedades.

Las tinciones suelen estar formadas por sales orgánicas con iones positivos y negativos. Los iones son moléculas cargadas.

• Las tincionesbásicas tienen cationes cargados positivamente, lo que les permite unirse a estructuras cargadas negativamente, como los componentes nucleares. Un ejemplo de tinción básica es la hematoxilina.

• Las tincionesácidas contienen aniones cargados negativamente, lo que les permite unirse a estructuras cargadas positivamente, como los componentes del citoplasma. Un ejemplo de tinción ácida es la eosina.

Tinción de estructuras tisulares

Puedes pensar en las manchas como si trabajaras con tintes capilares en la peluquería. El tinte penetra en la cutícula del pelo y se une a ella. Esto hace que el pelo se coloree permanentemente como las células y los tejidos cuando se tiñen con tintes.

Al igual que los tintes capilares, los distintos tipos de tintes colorean estructuras celulares diferentes. Por ejemplo, algunas tinciones pueden teñir toda la célula, mientras que otras tiñen compartimentos específicos, como los núcleos.

• El diferente potencial de tinción de las tinciones es la razón por la que a menudo utilizamos varios tintes juntos.

Cuando teñimos tejidos humanos, teñimos cuatro tipos básicos: tejido muscular, conjuntivo, epitelial y nervioso.

• Los tejidosmusculares son los que se encuentran en las paredes del corazón (cardíacos), unidos a tendones o huesos (esqueléticos) y en los órganos internos huecos (lisos).

• Los tejidosconectivos son tejidos que se encuentran entre otros tejidos de todo el cuerpo.

• El tejidoepitelial es el tejido que recubre las paredes o cavidades de muchos órganos. Este tejido también incluye nuestra piel o epidermis.

• El tejidonervioso es el tejido que comprende el sistema nervioso. El sistema nervioso permite que el cerebro y la médula espinal se comuniquen con el cuerpo.

Los cuatro tejidos básicos que solemos estudiar para las Plantas son el dérmico, el vascular, el del suelo y el meristemático.

• El tejido dérmico también se denomina epidermis, la piel de la planta. Cubre las hojas, las flores, las raíces y los tallos de la planta.

• El tejidodel suelo es el tejido que no es ni dérmico ni vascular (parénquima, colénquima y esclerénquima).

• El tejidovascular es el que transporta nutrientes y fluidos (el xilema y el floema).

• El tejidomeristemático está formado por células no diferenciadas que pueden sufrir División Celular y desarrollarse en otros tejidos.

Solemos clasificar las tinciones como directas o indirectas. En la tinción indirecta interviene un mordiente, mientras que en la tinción directa no. Uno de los campos más conocidos en los que utilizamos la tinción en los laboratorios es la histología.

• Lahistología es la rama de la biología que estudia la anatomía estructural de los tejidos. En cambio, la citología analiza la estructura de los tejidos, y la llamamos organología por los órganos.

Tipos de tinción de tejidos

Hay muchas tinciones en los tejidos, y a menudo las combinamos para visualizar varias partes de una célula o tejido. Éstas son algunas de las tinciones más comunes que utilizan los científicos:

La hematoxilina es un colorante básico que tiñe las estructuras ácidas con una tonalidad púrpura/azulada, como los componentes nucleares, tal como se muestra en la figura 1. Los componentes nucleares incluyen el núcleo, donde se almacena el ADN, el ARN en los ribosomas y el ARN en el retículo endoplásmico rugoso.

Figura 1: Tinción de hematoxilina y eosina (tinción H&E) de tejido cerebral de un paciente con encefalitis rabiosa. Biblioteca de Imágenes de Salud Pública (PHIL), CDC.

La eosina es una contratinción que se utiliza después de la hematoxilina y tiñe con una tonalidad rosa/roja, como se muestra en la Figura 1. Es una tinción ácida que se dirige a estructuras básicas como el citoplasma. El citoplasma es el material del interior de la célula que incluye todas las estructuras celulares excepto el núcleo.

Tinción de Gram

La tinción deGram es una tinción indirecta que utiliza yodo como mordiente. Este tipo de tinción se utiliza para diferenciar especies bacterianas mediante la tinción de la pared celular.

Las bacterias Grampositivas tienen gruesas capas de peptidoglicano en sus paredes celulares, lo que hace que retengan la tinción con violeta cristal. Esto significa que las bacterias Gram-positivas se teñirán de violeta o púrpura, como se muestra en la Figura 2.

• El Bacillus anthracis, como se ilustra en la Figura 2, es una bacteria Gram-positiva con forma de bastoncillo que causa el carbunco. El carbunco se produce cuando las esporas penetran en nuestro organismo y provocan una enfermedad grave.

Figura 2: Tinción de Gram positiva con Bacillus anthracis. Biblioteca de Imágenes de Salud Pública (PHIL), CDC.

En cambio, las bacterias Gram negativas tienen finas capas de peptidoglicano en sus paredes celulares, lo que hace que se tiñan de rosa/rojo, como se muestra en la figura 3.

• La Shigella dysenteriae, como se ilustra en la Figura 3, es una bacteria Gram negativa con forma de bastoncillo que causa la shigelosis. La shigelosis es una enfermedad infecciosa que causa fiebres, diarrea y problemas estomacales graves.

Figura 3: Bacteria Shigella dysenteriae, gramnegativa, con forma de bastoncillo. Biblioteca de Imágenes de Salud Pública (PHIL), CDC.

Procedimiento de tinción de tejidos

Antes de teñir los tejidos, hay que preparar las muestras de tejido. Por lo general, los pasos son la fijación, el procesamiento, la incrustación, la sección y larecuperación de antígenos , si es necesario.

Lafijación se realiza para preservar la forma y estructura de la célula y dotarla de mayor rigidez mediante productos químicos. La mayoría de la gente utiliza el producto químico formalina tamponada neutra al 10% durante 24-72 horas para la mayoría de las muestras. Los demás pasos suelen estar automatizados en la mayoría de los laboratorios actuales.

Ladeshidratación es el proceso que elimina el agua del tejido para endurecerlo. Lo más probable es que este paso esté automatizado en un laboratorio.

Laincrustación es el proceso de introducir los tejidos en parafina para permitir una mejor extracción de los tejidos. Puedes ver el resultado de la incrustación si observas el bloque de parafina suspendido que aparece en la Figura 4.

Como se muestra en la Figura 4, el seccionamiento con un micrótomo corta los bloques de cera de parafina de la incrustación en secciones finas en portaobjetos de microscopio para su examen. Podemos considerar el microtomo no automatizado fotografiado en la Figura 4 como un sacapuntas y el bloque de cera situado cerca de la parte superior como tu lápiz. Giramos el mango del lado derecho para obtener "virutas de lápiz". Estas virutas de lápiz son lo que hacemos flotar en el baño de agua para colocarlas en portaobjetos limpios.

Figura 4: Cómo cortan los científicos los tejidos. Wikimedia, EPA (Dominio público).

Larecuperación de antígenos se produce cuando se atenúan o eliminan las modificaciones químicas realizadas por la fijación con formalina.

Una vez que los tejidos están adecuadamente preparados, están listos para ser teñidos. El procedimiento general depende de la tinción que se utilice. Pero, en general, los pasos para teñir los tejidos son los siguientes:

• Después de seccionar o cortar los tejidos en finas láminas de cera, como se muestra en la Figura 4, debemos utilizar un baño de agua caliente para que el tejido o las finas secciones de cera floten hasta la superficie, donde podremos recogerlos utilizando los portaobjetos limpios.

• A continuación, tiñe el portaobjetos con la tinción elegida según sea necesario. Asegúrate de seguir las instrucciones de la tinción específica que estés utilizando.

• Normalmente, si la gente tiene más de un portaobjetos que teñir, utilizará gradillas de teñido y lo sumergirá todo de un lado a otro en la solución de teñido y en una solución de agua. La solución acuosa sirve para eliminar el exceso de manchas. Asegúrate de seguir las instrucciones propias de cada tipo de mancha.

• Limpia cuidadosamente la parte posterior del portaobjetos con toallitas de papel.

• Ahora puedes colocar el portaobjetos en el microscopio con la muestra hacia arriba y poner el objetivo a 10X. 10X es el aumento más bajo y te proporciona la visión más general. Después, selecciona tu zona de interés en el tejido y ajusta el objetivo en consecuencia, como se ilustra en la figura 5.

Figura 5: Científico examinando un portaobjetos de tejido al microscopio. Fuerzas Aéreas de EE.UU. (Dominio público).

Ejemplo de tinción de tejidos

Los ejemplos de tinción de tejidos o los casos prácticos en los laboratorios suelen incluir kits de tinción con varias tinciones a la vez, como las tinciones de tricrómico de Masson.

En general, el músculo y la queratina aparecen de color rojo y rosa para el citoplasma, azul/verde para los colágenos y el hueso, y negro/marrón para los núcleos celulares.

Los científicos realizaron un estudio en el que ratones inhalaron p-cloro-α,α,α-trifluorotolueno, un carcinógeno, durante dos años para conocer su toxicología y efectos cancerígenos. En la Figura 6, puedes ver una región de los pulmones en la que falta tejido conjuntivo fibroso azul/verde en un ratón macho de control.

Cuando se compara la Figura 6 con la Figura 7, puedes ver un extenso tejido conectivo fibroso azul/verde debido a la fibrosis peribronquiolar causada por la inhalación del carcinógeno. Básicamente, este estudio demuestra que los científicos pueden utilizar muchas tinciones diferentes, como el tricrómico, para obtener la investigación o la información necesarias en relación con sus experimentos.

Figura 6: Tinción Tricrómica de Masson en la región bronquiolar del pulmón de un ratón macho. Biblioteca Nacional de Medicina, Institutos Nacionales de Salud.

Figura 7: Fibrosis peribronquiolar en los bronquiolos pulmonares de un ratón no control. Biblioteca Nacional de Medicina, Institutos Nacionales de Salud.